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肿瘤临床科研服务
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数字PCR技术

 原理:将一个标准PCR反应分配到大量微小的反应器中,在每个反应器中包含或不包含一个拷贝的目标分子(DNA模板) ,实现“单分子模板PCR扩增”,扩增结束后,通过阳性反应器的数目“数出”目标序列的拷贝数。

仪器:QuantStudio 3D数字PCR仪系统

流程:首先,将混有样品和检测探针PCR反应体系均匀分散至一张带有2万个微孔的芯片上,形成近2万个相互独立的微反应体系;经PCR扩增后,检测每个微孔的荧光信号;最后统计计算目标片段拷贝数。
优点:可绝对定量,灵敏度可达单个核酸分子,检测限低至0.01%

缺点:
只能检测已知的突变位点,通量低。


应用:
 

产品名称

适合肿瘤

适用样本

应用

数字PCR技术

所有肿瘤

血浆ctDNA

FFPE

1) ctDNA直接检出已知的肿瘤特征的低频体细胞突变,用于早期诊断、病程监控、疗效评估等,可以做到绝对定量。

2) 针对利用扩增子测序技术从ctDNA中检出的低频体细胞突变进行序列验证。


代表案例:
利用数字PCR技术从ctDNA中直接检出已知的肿瘤特征体细胞突变。


目的:采用
dPCR技术灵敏而准确的动态监测治疗阶段病人血浆中癌症相关低丰度EGFRBRAFKRAS基因突变(包括耐药突变)突变频率的变化,以便调整治疗方案。 结果:9个经erlotinib一线治疗之后的NSCLC病人血浆中EGFR基因突变L858RT790M的突变频率随时间变化而变化。

文献出处:Oxnard G Ret al.Clinical Cancer Research 2014(20):1698-1705.

 


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